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您有一份《離心機梯度指南》待接收

發布時間:2020-5-9 10:52:16??????點擊:

  當離心機制備的提副業是凹狀梯度時,與凸狀梯度相反,先從混合室里流到離心管的是重端梯度液,制備時,輕液要緩慢的鋪上,因而要求針頭以相應的速度抬起,但在多數情況下,只是簡單的將離心管斜放一定角度,將針頭烤放于離心管口,使溶液沿管壁緩緩流下,逐步鋪上,加完后,再把離心管垂直放好加樣。此時應注意的是,所選用離心管的材料*好是親水性的,如是憎水性離心管,可用一些鹽,這樣再加入梯度溶液時,可保證均勻的流下。

  為了密度梯度和樣品區帶的穩定,加到密度梯度液柱頂部樣品的密度必須小于梯度液頂部的密度,如果不是這樣,樣品將以塌陷的方式通過梯度,直到到達等密度區。離心機廠在這個過程中樣品層將明顯的擴展,纏上的小滴沉降會造成區帶分辨力下降。

  離心機分離技術的形式有離心沉降、離心過濾、離心分離和離心分析等。

  1、離心沉降:依據不同大小和密度的顆粒在離心力場中沉降速度的不同進行分離。

  2、離心過濾:輔以濾材,利用離心力進行分離。

  3、離心分離:借助梯度介質,利用離心力分離密度和沉降系數不同的顆粒。

  4、離心分析:采用特殊的轉子和檢測手段,測定顆粒的密度、分子量和沉降系數等物理參數。

  一、離心機梯度介質的選用:

  1、鹽梯度介質。

  2、小分子有機物如蔗糖。

  3、三碘化苯衍生物。

  4、有機高聚物。

  5、膠態二氧化硅。

  二、離心機梯度的密度范圍:

  1、速率區帶離心的介質密度小于樣品中各種顆粒的密度。

  2、等密度區帶離心的介質密度大于樣品中各種顆粒的密度。

  三、離心機梯度的容量:

  指在達到分離要求的前提下,梯度介質容納樣品的大數量。

  1、與樣品組成和分離要求有關。

  2、與梯度總體積、斜率和介質粘度有關。

  3、與轉速和轉子形式有關。

  以冷凍離心機的梯度介質為例,可以歸結為一下特點,梯度介質應該是惰性的,至少對被分離顆粒沒有毒性。應知道梯度介質的理化特性,能夠利用這些特性中的一種或多種特性(如折射率)測定梯度介質的濃度。梯度介質要能夠把懸浮液中的顆粒定量的分離出來,即要求用它所配置的梯度柱要有確定的密度范圍。在給定的密度范圍內,梯度介質對滲透壓敏感的顆粒應該是等滲的。梯度介質應能調到與被分離顆粒生理狀態一致的PH值和離子強度,并且不管介質濃度如何變化,PH值和離子強度都保持不變,也不會發生水合作用。在給定的密度范圍內,梯度介質的粘度應盡可能低。梯度介質不會干擾分級分離時樣品區帶的監測。

  離心機梯度介質應該很方便的從分離的顆粒中除去,并且不損失樣品的活性。能夠消毒,并且分離特性不變,不腐蝕所用的離心管、轉子和各種量器。所用的梯度材料應該是純的物質,價格便宜,貴重材料使用后便于回收再利用。


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